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上海抚生实业有限公司
人肾透明细胞癌细胞;Caki-2使用说明书一般2-3天更换一次培养基,这取决于细胞生长的速度。许多细胞培养实验室通常在周一,周三,周五更换培养基。
产品名称 | 人肾透明细胞癌细胞;Caki-2使用说明书 |
货期 | 3-5天 |
发货地 | 上海 |
细胞名称 人肾透明细胞癌细胞;Caki-2使用说明书
形态特性 上皮细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞源自一位69岁白人男性的初期肾腺癌组织
培养条件 McCoy's 5A Media (Modified with Tricine) 10%FBS
传代方法 1:3~1:6传代,2~3天换液一次
传代情况 P31
冻存条件 基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法(-)
STR Amelogenin:X,Y;CSF1PO:10,12;D13S317:10;D16S539:9,13;D18S51:17;D19S433:13,14;D21S11:27,31;D2S1338:17,20;D3S1358:14;D5S818:11;D7S820:12;D8S1179:10;FGA:22;TH01:6;TPOX:9,11;vWA:16,17;
同工酶
染色体 亚五倍体,亚六倍体
使用权限 A类
复苏操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
人抗糖蛋白抗体(GP)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人抗髓鞘相关糖蛋白抗体(MAG)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人抗髓磷脂抗体IgA(anti-myelin Ab)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人抗双链DNA抗体/天然DNA抗体(dsDNA)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人抗鼠抗体(HAMA)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人抗生长激素抗体(GHAb)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人抗肾小球基底膜抗体(GBM)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人抗肾小管基底膜抗体(TBM)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装3-甲氧基苯肼盐酸 CAS号: 39232-91-2 现货供应
1-Boc-3-甲氨基哌啶 CAS号: 392331-89-4 说明书
六氟苯 CAS号: 392-56-3 报价
4-氨基-2-苯甲 酸 CAS号: 393-06-6 进口、国产
5-氟-2-硝基三氟甲苯 CAS号: 393-09-9 现货供应
5-羟基* CAS号: 3934-87-0 说明书
1,9-壬二醇 CAS号: 3937-56-2 报价
4-氯-3,5-二硝基三氟甲苯 CAS号: 393-75-9 进口、国产
甲氧基乙酸乙酯 CAS号: 3938-96-3 现货供应
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