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上海抚生实业有限公司
人髓样甲状腺肿瘤细胞;TT使用说明书细胞一般2-3天更换一次培养基,这取决于细胞生长的速度。许多细胞培养实验室通常在周一,周三,周五更换培养基。
产品名称 | 人髓样甲状腺肿瘤细胞;TT使用说明书 |
货期 | 3-5天 |
发货地 | 上海 |
细胞名称 人髓样甲状腺肿瘤细胞;TT使用说明书
形态特性 上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性 TT细胞由Leong SS等,自一位77岁白人女性甲状腺髓样癌患者的穿刺活检样本中建立。TT细胞持续产生高水平的降血钙素和CEA。更换培养基后24h和72h,在培养基中检测到的免疫活性的降血钙素浓度分别为3900 pg/106个细胞和7700 pg/106个细胞。 72小时后CEA积累浓度超过27 ng/106个细胞;该细胞zui初是在RPMI1640培养液中培养,可产生神经肽,但还不知道在F12培养液中培养是否会产生。
培养条件 F12K 10%FBS
传代方法 1:3~1:4传代,每周换液2次。
传代情况 C5
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:10,13;D13S317:11;D16S539:12,13;D18S51:12;D19S433:14,15;D21S11:29,32.2;D2S1338:17,23;D3S1358:15;D5S818:12,13;D7S820:10,12;D8S1179:15,16;FGA:21,25;TH01:6,9;TPOX:8,11;vWA:16,18;
同工酶
染色体 20~44;65~79
使用权限 A类
复苏操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
3,4-环氧四氢呋喃 CAS号: 285-69-8 报价
2-甲基-3-呋喃硫醇 CAS号: 28588-74-1 进口、国产
3,4-(亚甲基二氧)苯乙酸 CAS号: 2861-28-1 现货供应
氧化环己烯 CAS号: 286-20-4 说明书
N-Boc-1,2,5,6-四氢吡啶-4-硼酸频哪醇酯 CAS号: 286961-14-6 报价
D-阿拉伯糖 CAS号: 28697-53-2 进口、国产
十八烷基异氰酸酯 CAS号: 2877-26-1 现货供应
2-甲基烯丙基胺 CAS号: 2878-14-0 说明书
4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-c]吡啶盐酸盐 CAS号: 28783-41-7 报价
邻/对甲苯磺酸甲酯 CAS号: 28804-47-9 进口、国产
3-氰基苯肼盐酸盐 CAS号: 2881-99-4 现货供应
三氮唑 CAS号: 288-36-8 说明书人神经细胞粘附分子配体1(NCAM-L1/CD171)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人神经特异性烯醇化酶(NSE)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人神经肽Y(NP-Y)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人神经肽A(NKA)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人神经髓鞘蛋白1(p1)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人神经髓鞘蛋白(p2)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人神经丝蛋白(NF)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人神经生长因子(NGF)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人神经生长导向因子Slit2 ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
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