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人急性早幼粒白血病细胞;HL-60使用说明书

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所  在  地上海市

更新时间:2017-01-20 13:24:02浏览次数:429次

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产品简介

人急性早幼粒白血病细胞;HL-60使用说明书细胞一般2-3天更换一次培养基,这取决于细胞生长的速度。许多细胞培养实验室通常在周一,周三,周五更换培养基。

详细介绍

产品名称人急性早幼粒白血病细胞;HL-60使用说明书
货期3-5天
发货地上海

细胞名称  人急性早幼粒白血病细胞;HL-60使用说明书
形态特性   髓母细胞样
生长特性  悬浮生长
特征特性   该细胞由Collins SJ从一位患有急性早幼粒细胞性白血病的36岁白人女性的外周血中分离建立;可自发分化,或在丁酸盐、次黄嘌呤、佛波醇肉豆蔻酸(PMA,TPA)、DMSO(1% to 1.5%)、*和*的刺激下发生分化;PMA刺激后可分泌TNF-α。该细胞具有吞噬活性和趋化反应,癌基因myc阳性,表达补体受体和FcR。 
培养条件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  20%FBS
传代方法   维持细胞浓度在1×105~1×106/ml,每2~3天换液1次。
传代情况  C5
冻存条件   基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测  培养法(-)
STR   Amelogenin:X;CSF1PO:13,14;D13S317:8,11;D16S539:11;D18S51:14,15;D19S433:14;D21S11:29,30;D2S1338:17;D3S1358:16;D5S818:12;D7S820:11,12;D8S1179:13;FGA:22,24;TH01:7,8;TPOX:8,11;vWA:16;
同工酶  
染色体   34~43
使用权限  A类

复苏操作要点: 
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。 
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。 
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。 
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。 
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。 
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗
KT3 tag    英文名称:    KT3 tag抗体    ?0.1ml
KLK1    英文名称:    *1抗体    ?0.1ml
KLK3    英文名称:    *3/*3抗体    ?0.1ml
KLK4    英文名称:    *4抗体    ?0.1ml
KMT1C    英文名称:    组蛋白H3赖氨酸9甲基化1C抗体    ?0.2ml
Kif14 protein    英文名称:    驱动蛋白家族Member14蛋白抗体    ?0.2ml
Ki-67    英文名称:    Ki67蛋白抗体    ?0.1ml
KCNH1    英文名称:    钾离子通道蛋白EAG1抗体    ?0.1ml
KLF6    英文名称:    转染抑癌基因KLF6抗体    ?0.1ml
KLF8    英文名称:    KLF样转录因子8抗体    ?0.1ml8-epi-PGF2 Alpha (Rabbit 8-epi-prostaglandin F2alpha) ELISA Kit  兔8-异构前列腺素    Multi-class antibodies    规格:     96T
PF-4/CXCL4 (Rabbit Plaet Factor 4) ELISA Kit  兔子血小板因子4    Multi-class antibodies    规格:     96T
Beta-TG (Rabbit Beta-Thromboglobulin) ELISA Kit  兔子β血小板球蛋白/β血栓环蛋白    Multi-class antibodies    规格:     96T
NE (Rabbit neutrophil elastase) ELISA Kit  兔子中粒细胞弹蛋白酶    Multi-class antibodies    规格:     96T
C3a (Rabbit Complement fragment 3a) ELISA Kit  兔子补体片断3a    Multi-class antibodies    规格:     96T
MMP-3 (Rabbit matrix metalloproteinase 3) ELISA Kit  兔子基质金属蛋白酶3    Multi-class antibodies    规格:     96T
TRAP-5b ELISA Kit(Rabbit)  兔酒石酸磷酸酶TRAP-5b ELISA试剂盒    Multi-class antibodies    规格:     96T
sCD40L (Rabbit differentiation 40 ligand) ELISA Kit  兔子可溶CD40配体    Multi-class antibodies    规格:     96T
MHC I /RLA I (Rabbit major histocompatibility complex I ) ELISA Kit  兔主要组织相容复合体Ⅰ类    Multi-class antibodies    规格:     96T

 

 


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