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上海抚生实业有限公司
人急性淋巴母细胞性白血病细胞;MOLT-4使用说明书细胞一般2-3天更换一次培养基,这取决于细胞生长的速度。许多细胞培养实验室通常在周一,周三,周五更换培养基。
【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 人急性淋巴母细胞性白血病细胞;MOLT-4使用说明书
形态特性 淋巴母细胞样;圆形
生长特性 悬浮生长
特征特性 MOLT-4与MOLT-3来源于一名19岁的男性急性淋巴细胞性白血病的复发患者,该患者前期接受过多种药物联合*。MOLT-4细胞系为T淋巴细胞起源,p53基因的第248位密码子有一个G→A突变,不表达p53,不表达免疫球蛋白或EB病毒;可产生高水平的末端脱氧核糖转移酶;表达CD1 (49%), CD2 (35%), CD3 A (26%) B (33%) C (34%), CD4 (55%), CD5 (72%), CD6 (22%), CD7 (77%)。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
传代方法 维持细胞浓度在4×105/ml~2×106/ml;根据细胞浓度每2~3天补液1次。
传代情况 C5
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法(-)
STR Amelogenin:X,Y;CSF1PO:11,12,13;D13S317:12,13;D16S539:11,14;D18S51:13,17;D19S433:14,15;D21S11:28,29,30,31;D2S1338:23,24;D3S1358:14,16;D5S818:12;D7S820:8,10,11;D8S1179:9,14;FGA:22,23,25;TH01:6,8;TPOX:8;vWA:17,18
同工酶
染色体 84~89
使用权限 A类
产品名称 | 人急性淋巴母细胞性白血病细胞;MOLT-4使用说明书 |
货期 | 3-5天 |
发货地 | 上海 |
复苏操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
NES/KLK10 英文名称: 上皮细胞特异蛋白1抗体 ?0.1ml
phospho-KCNC1(Ser503) 英文名称: 磷酸化离子通道蛋白Kv3.1抗体 ?0.1ml
KAT4 英文名称: 细胞周期基因1蛋白抗体 ?0.1ml
KLF5 英文名称: 驱动蛋白KIF5B抗体 ?0.1ml
KLHL13 英文名称: kelch样蛋白13抗体 ?0.2ml
KCNN3 英文名称: 钙激活钾通道蛋白3抗体 ?0.1ml
KIBRA 英文名称: 肾脏和脑蛋白抗体 ?0.2ml
KIF2B 英文名称: 有丝分裂驱动蛋白样2B抗体 ?0.2ml
KLHL9 英文名称: kelch样蛋白9抗体 ?0.2ml
KIF15 英文名称: 驱动蛋白家族成员15抗体 ?0.2ml
KNTC1 英文名称: 着丝点关联蛋白1抗体 ?0.2ml
KLHDC5 英文名称: kelch样蛋白5抗体 ?0.2mlIL-6 (Rabbit Interleukin 6) ELISA Kit 兔白介素6 Multi-class antibodies 规格: 96T
Alpha2-AP (Rabbit Alpha2-Antiplasmin) ELISA Kit 兔子α2抗纤溶酶 Multi-class antibodies 规格: 96T
SAA (Rabbit Serum amyloid A) ELISA Kit 兔血清淀粉样蛋白A Multi-class antibodies 规格: 96T
Hpt/HP (Rabbit Haptoglobin) ELISA Kit 兔结合珠蛋白/触珠蛋白 Multi-class antibodies 规格: 96T
Plg (Rabbit Plasminogen) ELISA Kit 兔子纤溶酶原 Multi-class antibodies 规格: 96T
BMPs (Rabbit bone morphogenetic proteins) ELISA Kit 兔骨形成蛋白 Multi-class antibodies 规格: 96T
OPG (Rabbit Osteoprotegerin) ELISA Kit 兔骨保护素 Multi-class antibodies 规格: 96T
Amylin (Rabbit Amylin ) ELISA Kit 兔胰淀素 Multi-class antibodies 规格: 96T
cTn- I (Rabbit cardiac troponin I ) ELISA Kit 兔心肌肌钙蛋白Ⅰ Multi-class antibodies 规格: 96T
RANKL (Rabbit receptor activator of nuclear factor kappa B ligand) ELISA Kit 兔核因子κB受体活化因子配基 Multi-class antibodies 规格: 96T
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