【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 EB病毒转化的人B淋巴细胞；KMY0911使用说明书
形态特性 淋巴母细胞样
生长特性 悬浮生长
特征特性 该细胞系来源于一无精症男性患者的外周血。2009年由中科院昆明细胞库通过EB病毒转化的方法建立。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
传代方法 1:2传代；5-6天一次
传代情况 P2
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 荧光法（-）
STR -
同工酶
染色体
使用权限 A类
复苏操作要点：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过zui易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
INSL3 英文名称： 胰岛素样蛋白3抗体 ?0.1ml
IRE1a 英文名称： 内质网核信号转导蛋白a1抗体 ?0.2ml
rhIL-18 英文名称： *18抗体 ?0.1ml
ITIH4 英文名称： α*重链H4抗体 ?0.2ml
IGBP1 英文名称： 免疫球蛋白结合蛋白-1抗体 ?0.1ml
IGFALS 英文名称： 胰岛素样生长因子酸不稳定亚基ALS抗体 ?0.2ml
Insulin(1D4:) 英文名称： 猪胰岛素单克隆抗体 ?0.1ml
IKK alpha 英文名称： KB抑制蛋白激酶α/IκBα/IKK-α/IKKα/I-κB-α 抗体 ?0.1ml
Insulin 英文名称： 抗*抗体 ?0.1ml
Phospho-INPPL1(Tyr1135) 英文名称： 磷酸化肌醇聚磷酸盐磷酸酶样蛋白1抗体 ?0.1ml
Insulin Receptor 英文名称： 胰岛素受体抗体 ?0.1ml
Insulin Receptor Alpha 英文名称： 胰岛素受体α抗体 ?0.1ml
Insulin Receptor Beta 英文名称： 胰岛素受体β抗体 ?0.1ml
IKK alpha + IKK beta 英文名称： KB抑制蛋白激酶α/β抗体 ?0.2ml
IL-12 英文名称： 白介素12抗体 ?0.1mlMA(Mouse Anti-myocardial antibody) ELISA Kit 小鼠抗心肌抗体 Multi-class antibodies 规格： 48T
CP/CER(Mouse Ceruloplasmin) ELISA Kit 小鼠铜蓝蛋白 Multi-class antibodies 规格： 48T
p53(Mouse p53/tumor protein) ELISA Kit 小鼠p53 Multi-class antibodies 规格： 48T
cGMP(Mouse Cyclic guanosine monophosphate) ELISA Kit 小鼠环磷酸鸟苷 Multi-class antibodies 规格： 48T
NOS(Mouse nitric oxide synthase) ELISA Kit 小鼠一氧化氮合成酶 Multi-class antibodies 规格： 48T
iNOS(Mouse inducible nitric oxide synthase) ELISA Kit 小鼠诱导型一氧化氮合成酶 Multi-class antibodies 规格： 48T
eNOS(Mouse Endothelial nitric oxide synthase) ELISA Kit 小鼠内皮型一氧化氮合成酶 Multi-class antibodies 规格： 48T
HIS(Mouse Histamine) ELISA Kit 小鼠组胺 Multi-class antibodies 规格： 48T
Lp-PL-A2(Mouse lipoprotein-associated phospholipase A2) ELISA Kit 小鼠脂蛋白相关磷脂酶A2 Multi-class antibodies 规格： 48T
