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上海抚生实业有限公司
人脐静脉细胞融合细胞;EA.hy926使用说明书,细胞一般2-3天更换一次培养基,这取决于细胞生长的速度。许多细胞培养实验室通常在周一,周三,周五更换培养基。
【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 人脐静脉细胞融合细胞;EA.hy926使用说明书
形态特性 梭形
生长特性 贴壁生长
特征特性 在PEG胁迫下,将原代培养的人脐静脉细胞与抗硫*的A549克隆株融合,构建了人脐静脉细胞株, EA.hy926。 融合子在HAT培养基上生长并以八因子相关抗原筛选。 EA.hy926已经过100次以上的群体倍增(PDLs)。 电镜照片显示Weibel-Palade小体的细胞质分布以及组织特异性的细胞器,分化的内皮细胞特性如血管生成,体内平衡/血栓形成,血压及炎症反应。
培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
传代方法 1:2传代;2-3天传代一次。
传代情况
冻存条件 基础培养基+8%DMSO+27%FBS
支原体检测 培养法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:10,11,12;D13S317:11;D16S539:11,12;D18S51:13,15,17;D19S433:13,14;D21S11:28,29,32;D2S1338:22,24;D3S1358:15,16;D5S818:11;D7S820:8,9,10;D8S1179:13;FGA:22,23;TH01:6,8,9.3;TPOX:8,9;vWA:14,17;
同工酶
染色体
使用权限 A类
产品名称 | 人脐静脉细胞融合细胞;EA.hy926使用说明书 |
货期 | 3-5天 |
发货地 | 上海 |
复苏操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
SO(Human anti-streptolysin O) ELISA Kit 人抗链球菌溶血素O/抗O Multi-class antibodies 规格: 48T
ACA(Human adrenal cortex antibody) ELISA Kit 人肾上腺皮质抗体 Multi-class antibodies 规格: 48T
GBM(Human glomerular basement membrane antibogy) ELISA Kit 人抗肾小球基底膜抗体 Multi-class antibodies 规格: 48T
BMG/ Beta2-MG(Human Beta2-microglobulin) ELISA Kit 人β2微球蛋白 Multi-class antibodies 规格: 48T
ANX- V (Human Annexin V ) ELISA Kit 人膜联蛋白Ⅴ Multi-class antibodies 规格: 48T
TBM(Human tubular basement membrane antibogy) ELISA Kit 人抗肾小管基底膜抗体 Multi-class antibodies 规格: 48T
AP13(Human apelin 13) ELISA Kit 人apelin 13 Multi-class antibodies 规格: 48T
AP36(Human Apelin 36) ELISA Kit 人Apelin 36 Multi-class antibodies 规格: 48T
Tn-T(Human Troponin T) ELISA Kit 人肌钙蛋白T Multi-class antibodies 规格: 48T
ES-Ab(Human anti-Endostatin antibody) ELISA Kit 人血管内皮抑素抗体 Multi-class antibodies 规格: 48TRIK1 英文名称: *受体红藻氨酸离子1抗体 ?0.2ml
GRASP 英文名称: 一般受体磷酸肌醇相关支架蛋白1抗体 ?0.2ml
GRIK5 英文名称: *受体红藻氨酸离子5抗体 ?0.1ml
GODZ 英文名称: 棕榈酰转移酶GODZ抗体 ?0.2ml
GPSM1 英文名称: G蛋白信号调节蛋白1抗体 ?0.2ml
GABA A Receptor beta 2 + 3 英文名称: G氨基丁酸受体β2+3/GABAA Rβ2+GABAA Rβ2抗体 ?0.2ml
G protein alpha 英文名称: G蛋白α抗体 ?0.2ml
G protein beta subunit like 英文名称: G蛋白β样蛋白抗体 ?0.2ml
GTF2B 英文名称: 通用转录因子GTF2B抗体 ?0.2ml
phospho-gp130 (Ser782) 英文名称: 磷酸化gp130抗体 ?0.1ml
GLTPD2 英文名称: 糖脂转移蛋白结构域2抗体 ?0.2ml
GOLGA6L4 英文名称: 高尔基体膜相关蛋白6样蛋白4抗体 ?0.2ml
GIPC-2 英文名称: 胞浆区相关蛋白GIPC2抗体 ?0.2ml
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