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上海抚生实业有限公司
人胚肺成纤维细胞;MRC-5培养,细胞一般2-3天更换一次培养基,这取决于细胞生长的速度。许多细胞培养实验室通常在周一,周三,周五更换培养基。
产品名称 | 人胚肺成纤维细胞;MRC-5培养 |
货期 | 3-5天 |
发货地 | 上海 |
细胞名称 人胚肺成纤维细胞;MRC-5培养
形态特性 成纤维细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性 MRC-5细胞系来自14周龄男性胎儿的正常肺组织,该细胞老化前能传代42~46个倍增时间。
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 新生牛血清,10%;水解乳蛋白,10%
传代方法 1:2-1:4
传代情况 P33
冻存条件 基础培养液+20%牛血清+10%DMSO
支原体检测 培养法(-)
STR Amelogenin:X,Y;CSF1PO:11,12;D13S317:11,14;D16S539:9,11;D18S51:15,21;D21S11:31.2;D3S1358:15,17;D5S818:11,12;D7S820:10,11;D8S1179:13;FGA:21,23;PentaD:12.;PentaE:12,16;TH01:8;TPOX:8;vWA:15
同工酶 人B,NP,G6PG,MD,AST
染色体
使用权限 A类
复苏操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
MMP-10(Human Matrix metalloproteinase 10) ELISA kit 人基质金属蛋白酶10 Multi-class antibodies 规格: 48T
MMP-1(Human Matrix metalloproteinase 1) ELISA kit 人基质金属蛋白酶1 Multi-class antibodies 规格: 48T
Flt3(Human FMS-like tyrosine kinase 3) ELISA Kit 人FMS样*激酶3 Multi-class antibodies 规格: 48T
Flt-3L(Human FMS-like tyrosine kinase 3 ligand) ELISA Kit 人FMS样*激酶3配体 Multi-class antibodies 规格: 48T
ACE(Human Angiotensin converting enzyme) ELISA Kit 人血管紧张素转化酶 Multi-class antibodies 规格: 48T
AMBP(Human alpha-1-microglobulin/bikunin precursor) ELISA Kit 人α1微球蛋白/bikunin前体 Multi-class antibodies 规格: 48T
Human podocin ELISA Kit 人Podocin Multi-class antibodies 规格: 48T
Human Nephrin ELISA Kit 人肾蛋白 Multi-class antibodies 规格: 48T
Alpha1-MG(Human Alpha1-microglobulin) ELISA Kit 人α1微球蛋白 Multi-class antibodies 规格: 48T
ALB(Human microalbunminuria) ELISA Kit 人尿微量白蛋白 Multi-class antibodies 规格: 48T
AAA(Human Anti-adrenocortical antibody) ELISA Kit 人抗肾上腺皮质抗体 Multi-class antibodies 规格: 48T
RANA(Human rheumatoid arthritis associated nuclear artigen) ELISA Kit 人抗类风湿关节炎核抗原 Multi-class antibodies 规格: 48TGlyt1 英文名称: *转运蛋白1抗体 ?0.2ml
Gsh1 英文名称: 生长激素释放激素同源盒蛋白1抗体 ?0.1ml
GYPB 英文名称: 血型糖蛋白δ抗体 ?0.2ml
GluR1 英文名称: *受体1抗体 ?0.1ml
OR10A5 英文名称: 味觉受体蛋白家族10亚基5抗体 ?0.2ml
phospho-GluR1 (Ser863) 英文名称: 磷酸化*受体1抗体 ?0.1ml
phospho-GluR1 (Ser645) 英文名称: 磷酸化*受体1抗体 ?0.1ml
phospho-GluR1(Ser831) 英文名称: 磷酸化*受体1抗体 ?0.1ml
GPR48 英文名称: G蛋白偶联受体48抗体 ?0.1ml
GABRA2 英文名称: G氨基丁酸A型受体α2/GABAA Rα2抗体 ?0.2ml
GABRA4 英文名称: G氨基丁酸A型受体α4/GABAA Rα4抗体 ?0.2ml
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