【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 人胚肺二倍体细胞；KMB-17使用说明书
形态特性 成纤维细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性 来自于4周龄女孩胚胎，1975年中国医学*昆明医学生物学研究所建立；可作为转染宿主，用于肺损伤或分化的研究。
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 新生牛血清，10%；水解乳蛋白，10%
传代方法 1：2-1：4
传代情况 P10
冻存条件 基础培养液+20%牛血清+10%DMSO
支原体检测 培养法（-）
STR Amelogenin:X； D7S820:9,11；CSF1PO:12；D13S317:9,12；D16S539:11,13；D18S51:14,17；D21S11:29,30；D3S1358:16；D5S818:13；D8S1179:11,13；FGA:20,27；PentaD:9,13；PentaE:12,15；TH01:7；TPOX:10,11；vWA:14,18
同工酶 人B,NP,G8PG,MD,AST
染色体
使用权限 A类
复苏操作要点：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过zui易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
eNOS(Human Endothelial nitric oxide synthase) ELISA Kit 人内皮型一氧化氮合成酶 Multi-class antibodies 规格： 48T
HO-1(Human heme oxygenase 1) ELISA Kit 人血红素氧合酶1 Multi-class antibodies 规格： 48T
iNOS(Human inducible nitric oxide synthase) ELISA KIT 人诱导型一氧化氮合成酶 Multi-class antibodies 规格： 48T
PL-A2(Human Phospholipidase A2) ELISA Kit 人磷脂酶A2 Multi-class antibodies 规格： 48T
NOS(Human nitric oxide synthase) ELISA Kit 人一氧化氮合成酶 Multi-class antibodies 规格： 48T
TE(Human omerase) ELISA Kit 人端粒酶 Multi-class antibodies 规格： 48T
MMP-5(Human matrix metalloproteinase 5) ELISA Kit 人基质金属蛋白酶5 Multi-class antibodies 规格： 48T
MMP-4(Human matrix metalloproteinase 4) ELISA Kit 人基质金属蛋白酶4 Multi-class antibodies 规格： 48T
MMP-9/Gelatinase B(Human matrix metalloproteinase 9/Gelatinase B) ELISA Kit 人基质金属蛋白酶9/明胶酶B Multi-class antibodies 规格： 48T
NSE(Human Neuron-specific enolase) ELISA Kit 人神经特异烯醇化酶 Multi-class antibodies 规格： 48T
CK-MB(Human Creatine Kinase MB isoenzyme) ELISA Kit 人肌酸激酶同工酶MB Multi-class antibodies 规格： 48TGPR124 英文名称： G蛋白偶联受体124抗体（肿瘤血管内皮标记物） ?0.1ml
Galectin 1 英文名称： 半乳糖凝集素1抗体 ?0.1ml
GANAB 英文名称： α葡萄糖苷酶2抗体 ?0.1ml
Galectin 7 英文名称： 半乳糖凝集素7抗体 ?0.2ml
GCDFP15 英文名称： 特异囊肿病液体蛋白15抗体 ?0.2ml
GCET1 英文名称： B淋巴细胞生发中心相关蛋白抗体 ?0.2ml
GASC1 英文名称： 鳞状细胞癌增强蛋白1抗体 ?0.1ml
G alpha gust 英文名称： Gα gust抗体 ?0.2ml
GLS1 英文名称： *酶抗体 ?0.2ml
GCMA 英文名称： 绒毛膜特异转录因子GCMa抗体 ?0.1ml
GBP5 英文名称： G蛋白结合蛋白5抗体 ?0.2ml
Cancer/testis antigen family 4 member 7 英文名称： 肿瘤/抗原家族4亚型7抗体 ?0.2ml
GFR alpha 3 英文名称： GDNF家族受体α3抗体 GFR α3 ?0.2ml
