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上海抚生实业有限公司
人胚胎心肌组织来源细胞;CCC-HEH-2培养,细胞一般2-3天更换一次培养基,这取决于细胞生长的速度。许多细胞培养实验室通常在周一,周三,周五更换培养基。
产品名称 | 人胚胎心肌组织来源细胞;CCC-HEH-2培养 |
货期 | 3-5天 |
发货地 | 上海 |
细胞名称 人胚胎心肌组织来源细胞;CCC-HEH-2培养
形态特性
生长特性 贴壁生长
特征特性 取材自引产的11周男性胚胎组织,该细胞由中国医学*基础医学研究所细胞资源中心建立。
培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 20%FBS
传代方法 1:3传代;3~4天1次。
传代情况 P4
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法(-)
STR
同工酶
染色体
使用权限 A类
复苏操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
ALP(Human alkaline phosphatase) ELISA Kit 人碱磷酸酶 Multi-class antibodies 规格: 48T
AZU(Human azurocidin) ELISA Kit 人天青杀素 Multi-class antibodies 规格: 48T
ATA(Human Angiotensinase A) ELISA Kit 人血管紧张肽酶A Multi-class antibodies 规格: 48T
PAMY(Human Pancreatic Amylase) ELISA Kit 人胰* Multi-class antibodies 规格: 48T
AlphaENOL(Human Alpha-enolase) ELISA Kit 人α烯醇化酶 Multi-class antibodies 规格: 48T
Human Collagenase Type II ELISA Kit 人胶原酶II Multi-class antibodies 规格: 48T
Human Collagenase I ELISA Kit 人胶原酶I Multi-class antibodies 规格: 48T
P-PKC(Human phospho Protein Kinase C) ELISA Kit 人磷酸化蛋白激酶C Multi-class antibodies 规格: 48T
pERK(Human phospho-extracellular signal-regulated kinase) ELISA Kit 人磷酸化细胞外信号调节激酶 Multi-class antibodies 规格: 48T
AChE(Human Acetylcholinesterase) ELISA Kit 人乙酰*酯酶 Multi-class antibodies 规格: 48T
GOD(Human glucose oxidase) ELISA Kit 人葡萄糖氧化酶 Multi-class antibodies 规格: 48T
TH(Human tyrosine hydroxylase) ELISA Kit 人*羟化酶 Multi-class antibodies 规格: 48TGABARAP 英文名称: γ-氨基丁酸受体相关蛋白抗体 ?0.2ml
GABRQ 英文名称: G氨基丁酸A型受体θ/GABAA Rθ抗体 ?0.2ml
GABRR1 英文名称: G氨基丁酸A型受体rho1 /GABAA Rρ1抗体 ?0.2ml
GABRR2 英文名称: G氨基丁酸A型受体rho2 /GABAA Rρ2抗体 ?0.2ml
GABABRBP 英文名称: G氨基丁酸B型受体结合蛋白抗体 ?0.2ml
GRID1 英文名称: *受体δ1/GluR-δ1抗体 ?0.2ml
GRINA 英文名称: *受体相关蛋白1抗体 ?0.2ml
GARP 英文名称: 环磷酸鸟苷门控通道蛋白CNG4抗体 ?0.2ml
Glycine Receptor alpha 1 + alpha 2 英文名称: *受体α1+*受体α2抗体 ?0.2ml
Glycine Receptor alpha 3 英文名称: *受体α3/GlyR α3抗体 ?0.2ml
GPRC5D 英文名称: G蛋白偶联受体C5家族亚型D抗体 ?0.2ml
GPR18 英文名称: G蛋白偶联受体18抗体 ?0.2ml
GPR65 英文名称: G蛋白偶联受体65抗体 ?0.2ml
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