| 上海懋康生物科技有限公司
主营产品： 硫酸诺尔斯菌素,D-荧光素,雷帕霉素 |
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更新时间：2024-04-07 14:05:16浏览次数：334
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Ar A4 Electrocompetent Cell
农杆菌电转感受态细胞
产品标签：
Ar A4；K599；C58C1；MSU440；Agrobacterium rhizogenes 发根农杆菌；pK7WGF2；Streptomycin 链霉素；Rifampicin利福平；
产品订购：
货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） |
MF2458-0500UL | Ar A4 Electrocompetent Cell 农杆菌电转感受态细胞 | 10×50μl | 720 |
MF2458-2500UL | Ar A4 Electrocompetent Cell 农杆菌电转感受态细胞 | 50×50μl | 3000 |
【好消息】：见我司懋康生物整理的根癌（发根）农杆菌感受态细胞技术专题。
菌株描述
发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）是根瘤菌科农杆属的一种革兰氏阴性土壤细菌，能够侵染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。起关键作用的是其携带的Ri质粒，含有负责发根自主性生长和冠瘿碱合成的基因。结构上与Ti质粒类似，主要有致毒区（Vir），T-DNA区以及冠瘿碱合成功能区等。
根据合成冠瘿碱的不同，Ri质粒分为4种类型：1）甘露碱型；2）黄瓜碱型；3）农杆碱型；4）米奇矛型。
发根农杆菌菌株Ar A4含天然农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围（玉米，烟草，胡萝卜、甘草等），同时具有卡那霉素抗性。
我司懋康生物提供的Ar A4电转感受态细胞经特殊工艺制作，特别适合大质粒的转化。基因型为Agrobacterium rhizogenes (kanR ) Ar A4 Ri (agropine type)，经pK7WGF2质粒（壮观霉素抗性）检测转化效率>105 cfu/μg DNA。
产品包装
组分编号 | 组分名称 | 货号（规格） | |
MF2458-0500UL | MF2458-2500UL | ||
MF2458-A | Ar A4 Electrocompetent Cell | 10×50μl | 50×50μl |
MF2458-B | pK7WGF2 Control Vector (10ng/μl) | 10μl | 10μl |
注意事项
感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。
3） 加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
为确保高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。
5） 电转感受态细胞中不可混入气泡，转化高浓度的质粒可相应减少终涂板用量。
6） 平板上克隆密度过大时，由于营养不足，克隆生长变慢，菌落变小。为获得大菌落，应减少质粒用量。
7） Ar A4具卡那霉素抗性，不可用于具卡那霉素抗性质粒的转化。
8） 为了保证加的转化效率，发根农杆菌的培养务必使用TY培养基（配方见附表1）。
9） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
将0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min，待其沥干水分，正置5min，使乙醇充分挥发干净，立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5min使其充分降温。
取-80℃保存的农杆菌感受态细胞插入冰中5min，待其*融化。
往50μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg（体积不大于6μl）质粒DNA，用手拍打管底使其混匀，立即插入冰中。用枪轻轻吹打混匀感受态细胞-质粒之后快速转移到电击杯中，盖上杯盖，空管保留待用【注意：质粒DNAhao用试剂盒抽提，且用双蒸水溶解。由于感受态转化效率较高，*次使用hao做预试验确定加的质粒用量】。
启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此参数参考Bio-rad，具体使用请参考电转仪推荐步骤来操作），将电击杯从冰中取出，吸水纸吸干外表面水分，快速放入电转槽中，启动电击，电击完成快速插入冰中。
加入1ml无抗生素的TY并转移到感受态空管中，于28℃振荡培养2~3h。
6) 6,000rpm离心1min，留取 100ul左右上清，之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的TY平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，28℃培养2-3天。
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附表1 固体和液体TY培养基配方
组分Component | TY（液体）/升 | TY（固体）/升 |
胰蛋白胨 Tryptone | 5g | 5g |
酵母提取物 Yeast extract | 3g | 3g |
琼脂 Agar | / | 15g |
补水到1L，121℃，20min高压灭菌 | 补水到1L，121℃，20min高压灭菌 | |
氯化钙 CaCl2 | 配制1M CaCl2水溶液，121℃，20min高压灭菌。之后按照10ml/L加入上方灭菌的液体营养液。 | 配制1M CaCl2水溶液，121℃，20min高压灭菌。之后按照10ml/L加入上方灭菌的液体营养液。 |
附表2常见发根农杆菌对抗生素敏感性总表
农杆菌菌株 | 羧苄（carb） | 链霉素（strep） | 利福平（rif） | 庆大霉素（gent） | 卡那霉素（kan） |
Ar A4 | S | S | S | S | R |
Ar Qual | S | R | S | R | S |
Ar 1193 | R | R | R | S | S |
K599 | S | R | S | S | S |
C58C1 | S | R | R | S | S |
MSU440 | S | R | S | S | S |
【备注】：S代表敏感，R代表抗性。 | |||||
附表3常见农杆菌抗生素配制方法
抗生素 | 配方 | 母液 | 工作液 |
羧苄青霉素 | 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 | 50mg/ml | 50μg/ml |
硫酸卡那霉素 | 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 | 50mg/ml | 50μg/ml |
链霉素 | 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 | 10mg/ml | 50μg/ml |
庆大霉素 | 去离子水溶解，0.22μm滤膜除菌 | 20mg/ml | 40μg/ml |
利福平 | DMSO溶解，0.22μm有机相滤膜除菌 | 10mg/ml | 20μg/ml |
氯霉素 | 无水乙醇溶解，0.22μm有机相滤膜除菌 | 34mg/ml | 34μg/ml |
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信"的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。
Ar A4 农杆菌电转感受态细胞 表达分析
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