使用目的:适用于检测人动植物组织匀浆、细胞上清、血清、血浆、尿液或其他相关生物液体中浓度。本试剂盒只能用于科学研究,不得用于临床诊断。
检测原理:试剂盒采用双抗体一步夹心法免疫吸附试验(ELISA) 。往预先包被抗体的微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
试剂盒规格配置:
自备物品:
①.酶标仪(450nm)
②.高精度加样器及枪头: 0. 5-10uL、2-20uL、 20-200uL、 200-1000uL
③.37 C恒温箱
操作步骤:
①.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4'C。
②.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50 μL。
③.样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
④.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP) 标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37C水浴锅或恒温箱温育60min。
⑤.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
⑥.每孔加入底物A、B各50μL, 37°C避光孵育15min。
⑦.每孔加入终止液50 μL,15min内, 在450nm波长处测定各孔的0D值。
结果判断:
绘制标准曲线:在Exce I工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应0D值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。