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1 使用目的：
本试剂盒用于蔬菜、水果、相应食物、水及中毒残留物中除虫菊酯(Pyrethrins)残留的定
量检测。
2 实验原理
本试剂盒采用竞争ELISA方法，在微孔板包被有除虫菊酯(Pyrethrins)偶联抗原，加入
除虫菊酯(Pyrethrins)标准品或样品，游离除虫菊酯(Pyrethrins)与微孔条上预包被的拟除虫菊
酯(Pyrethroids)偶联抗原互相竞争抗除虫菊酯(Pyrethrins)抗体酶标记物，用TMB底物显色，
加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在450nm波长下进行检测，吸光值与样品中
除虫菊酯(Pyrethrins)含量成反比，通过标准曲线计算样品中除虫菊酯(Pyrethrins)的含量。
3 试剂盒组成
3.1 预包被的除虫菊酯(Pyrethrins)偶联抗原的可拆酶标板：1块（12孔×8条）。
3.2除虫菊酯(Pyrethrins)标准品：6瓶（1ml/瓶），含量分别是：0ng/ml,
0.025ng/ml,0.1ng/ml,0.25ng/ml,1ng/ml,4ng/ml。
3.3抗除虫菊酯(Pyrethrins)抗体酶结合物：1瓶（6ml）。
3.4显色液A：1瓶（6ml）。
3.5显色液B：1瓶（6ml）。
3.6终止液：1瓶（6ml），2M硫酸。
3.7*：1瓶（10×, 6ml），用于样品稀释用。
3.8浓缩洗涤液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。
3.9说明书一份。
4 需要而未提供的材料
4.1 设备
4.1.1波长450nm酶标仪。
4.1.2粉碎机。
4.1.3量筒。
4.1.4振荡器。
4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman 或相当的滤纸。
4.1.7微量移液器。
4.2 试剂
4.2.1去离子水或蒸馏水。
4.2.2 甲醇。
5 贮存
5.1 试剂盒贮存于2~8℃，切勿冷冻
5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存
6 注意事项
6.1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。
总前列腺特异抗原(tPSA)ELISA试剂盒说明书
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6.2 不要使用过期试剂盒。
6.3 试剂盒使用前，将试剂恢复至室温（25±2℃），建议至少回温2小时。
6.4 标准品中含有除虫菊酯(Pyrethrins)，使用时应特别注意，操作时应带手套。
6.5 终止液中含有硫酸，使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。
6.6 不同标准品、样品所用吸头不能混用，否则会影响试验结果。
6.7 不同批号试剂盒中的试剂不得混用；不同标准品、样品所用吸头不得混用，否则会影响
实验结果。
6.8 稀释样本时必须用本试剂盒中的*，否则会影响实验结果
6.9 混合试剂时应避免起泡。
7 工作液准备
7.1 除虫菊酯(Pyrethrins)标准品溶液：0ng/ml, 0.025ng/ml,0.1ng/ml,0.25ng/ml,1ng/ml,4ng/ml
7.2 浓缩洗涤液：用蒸馏水按1:20(1+19)稀释备用
7.3 *：用蒸馏水按1:10(1+9)稀释备用
7.3 显色剂：已备用，避免光线直照
7.4 反应终止液：已备用
8 样品处理程序（样品在提取过程中，要严格按说明书操作，提取过程中应准确稀释，否则
会出现结果不准确，样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存）
8.1取10g粉碎的样品，加 20ml 70%甲醇溶液
8.2强力振荡3分钟
8.3用Whatman 滤纸过滤
8.4取25μl处理后的样品，加入25μl*于反应孔中（样本稀释倍数为2）
9 酶免分析步骤
9.1 实验须知
9.1.1 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温（25±2℃），时间约2小时。回温至室
温（25±2℃）后再取出微孔条，多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存
注：一定保证回温充分，否则影响检测的度和准确度。
9.1.2 使用后请立即将试剂放回2~8℃保存
9.1.3 请不要改变分析程序
9.1.4 请使用的微量移液器
9.1.5 操作一旦开始，请不要中断任何程序
9.1.6 ELISA结果的可重复性*程度的取决于操作程序，请严格按照要求操作
9.1.7 为避免交叉污染，每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样
9.1.8 加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面
9.2 分析步骤
9.2.1 预*行编号，标记B0、标准品和样品的位置，*进行双孔检测
9.2.2 取所需数量的微孔（微孔条可拆），将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存
9.2.3 样品稀释液（10×）、浓缩洗涤液（20×）稀释成工作液(蒸馏水或去离子水稀释)
9.2.4 在B0孔中加入50μl0.0 ng/ ml标准品溶液
9.2.5 在各标准孔中加入50μl的标准品溶液
9.2.6 在各样品孔中加入50μl样品溶液
9.2.7 在所有孔中加入50μl的抗除虫菊酯(Pyrethrins)抗体酶结合物
9.2.8 轻轻晃动反应板几秒钟。
9.3 37℃温浴30min （温浴过程中不时轻拍反应板，可以减少双孔误差）
9.3.1 甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板5次，zui后一次应在吸水纸上拍打以*除去孔中液
