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红细胞裂解液 A 型 ( 核酸纯化 ) 100mL规格

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更新时间:2019-01-21 08:23:00浏览次数:545次

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实验要点 :
1..红细胞裂解液 A 型 ( 核酸纯化 ) 100mL规格CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。  
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。 
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能*抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用苯酚和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的(苯酚—=25:24:1),的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
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注意事项:
1. .红细胞裂解液 A 型 ( 核酸纯化 ) 100mL规格组织和细胞取材速度要快,在获取后应当尽快浸入RNAwait,以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存,因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3. 保存样品的RNA提取:样本从-20℃或-80℃冰箱取出后,复苏到室温后,取出组织块,再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞,去除RNAwait,再用于提取RNA。后继的处理(如组织匀浆)可以在室温下进行,不必在液氮中操作,RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。

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