猪水疱疹病毒RT-LAMP试剂盒说明书 返回列表页

操作步骤：
1：样品准备：取1毫升细胞培养上清（贴壁和悬浮细胞都可以 已培养48小时以上），在16000g离心5分钟，小心弃去上清，避免丢失沉淀（沉淀量有可能很少，目视看不到）。将沉淀用无菌PBS重悬，在16000g离心5分钟，同样小心弃去上清，如此反复用无菌PBS洗三次 将获得的沉淀用100微升超纯水重悬，置于100℃水浴中孵育5分钟。如此制备好的样品可在4℃保存1到2个月。
2：PCR反应的准备：
待各组份融化后先瞬时离心，然后轻弹混匀。按下表在已灭菌的PCR管中配制反应体系，每次实验需加一个阴性和一个阳性对照，测试反应管可以有多个。配制过程中应注意无菌，并注意避免操作产生的气溶胶造成样品间的交叉污染，推荐在有风压的设备如超净台或生物安全柜中进行操作。建议配制完毕后瞬时离心以使液体沉至管底。

服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增鲍疱疹样病毒，与其他植物没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。
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使用及效果：
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

北京棒杆菌Bacillus sp.

石莼海菌Vibrio sp.

莫拉氏菌属Vibrio sp.

阿德利长西氏酵母Vibrio sp.

毡毛栓孔菌Bacillus firmus

壳菌Bacillus firmus

香葱链格孢菌Halobacillus sp.

类干酪乳杆菌Halobacillus sp.

芽胞杆菌Vibrio proteolyticus

酿酒酵母Vibrio proteolyticus

山西黑粉菌Bacillus aquimaris

罗伦隐球酵母Bacillus aquimaris

砖红镰孢Vibrio sp.

短短芽孢杆菌Bacillus sp.

密丛毛霉Halobacillus sp.

黏液杆菌属Bacillus firmus

山茶Vibrio proteolyticus

猪水疱疹病毒RT-LAMP试剂盒说明书Integrin beta 5  整合素β5抗体千斤拔5-硫代-D-葡萄糖Human MCF (Macrophage Chemotatic Factor) ELISA Kit

Integrin alpha 1/CD49a  整合素α1抗体三白草2-氯-6-氟苯酚Human MIP-3β/ELC/CCL19 (Macrophage Inflammatory Protein 3β) ELISA Kit

Integrin beta 7  整合素β7抗体山柰2-氯-6-氟苯酚Human MIP-5 (Macrophage Inflammatory Protein 5) ELISA Kit

Integrin Alpha V + Beta1  整合素αVβ1抗体仙茅2-氯-6-氟苯酚Human MIF (Macrophage Migration Inhibitory Factor) ELISA Kit

Integrin Alpha V + Beta 3  整合素αVβ3抗体贯叶金丝桃2-溴苯Human FZD8 (Frizzled Homolog 8) ELISA Kit

Integrin Alpha V + Beta 5   整合素αVβ5抗体芒果叶2-溴苯Human PDCD1 (Programmed Cell Death Protein 1) ELISA Kit

Integrin alpha E/CD103  整合素αE抗体玫瑰花2-溴苯Human AP (Allopregnanolone) ELISA Kit

IQGAP1  支架蛋白抗体密蒙花α-槐糖 单水合物Human CRHBP (Corticotropin Releasing Hormone Bingding Protein) ELISA Kit