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服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
班氏丝虫LAMP试剂盒图片 | Lamp kit for filariasis bancrofti | BJ-P988799 |
它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增鲍疱疹样病毒,与其他植物没有交叉反应。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
使用及效果:
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
3:结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
多主葡萄壳菌Bacillus cereus
枯草芽孢杆菌枯草亚种Alcanivorax sp.
孟氏假单胞菌Bacillus algicola
树舌5-2Bacillus barbaricus
Bacillus aryabhattaiBacillus altitudinis
细极链格孢Halomonas aquamarina
云芝Brevundimonas subribrioides
单梗头孢霉属Pseudomonas alcalophila
谷氨酸棒杆菌Pseudomonas putida
米曲霉Pseudomonas monteilii
简单芽孢杆菌Bacillus pumilus
耶尔森氏菌属Staphylococcus lentus
枯草芽孢杆菌Brevundimonas diminuta
解脂耶氏酵母Bacillus pumilus
金龟子绿僵菌Arthrobacter protophormiae
黄杆菌属Bacillus flexus
鼠伤寒沙门氏菌Bacillus cereus
班氏丝虫LAMP试剂盒图片LYVE-1 淋巴管内皮透明质酸受体抗体莫匹罗星N,N'-二叔丁氧羰基-L-组氨酸Human TDT (Terminal Deoxynucleotidyl Transferase) ELISA Kit
M2-PK/PKM2 酮酸激酶-M2抗体磷霉素钠N,N'-二叔丁氧羰基-L-组氨酸Human SMN1 (Survival of Motor Neuron 1, Telomeric) ELISA Kit
Phospho-PKM2 (Tyr105) 磷酸化酮酸激酶M2抗体酪蛋白4-O-(β-吡喃半乳糖)-D-吡喃甘露糖苷Human EM2 (Endomorphin 2) ELISA Kit
M2-PK (pyruvate Kinase M2) 酮酸激酶-M2可溶性淀粉5-溴-2-羟吲哚Human ETRA (Endothelin Receptor A) ELISA Kit
Integrin alpha E2 整合素alpha E2 抗体尿激酶5-溴-2-羟吲哚Human ECE1 (Endothelin Converting Enzyme 1) ELISA Kit
Integrin alpha L/CD11a 整合素αL抗体凝血酶(牛血)5-硝基吲哚-2-酮Human REPIN1 (Replication Initiator 1) ELISA Kit
CD11b/CD49d 整合素αM/巨噬细胞表面分子抗体纤维蛋白溶酶原(牛血)(牛纤溶酶原)5-硝基吲哚-2-酮Human EL/LIPG (Endothelial Lipase) ELISA Kit
Integrin Alpha X/CD11c 整合素αX抗体牛纤维蛋白原5-(甲基硫代)噻吩-2-羧酸Human VASPIN (Visceral Adipose Specific Serine Protease Inhibitor) ELISA Kit
操作步骤:
1:样品准备:取1毫升细胞培养上清(贴壁和悬浮细胞都可以 已培养48小时以上),在16000g离心5分钟,小心弃去上清,避免丢失沉淀(沉淀量有可能很少,目视看不到)。将沉淀用无菌PBS重悬,在16000g离心5分钟,同样小心弃去上清,如此反复用无菌PBS洗三次 将获得的沉淀用100微升超纯水重悬,置于100℃水浴中孵育5分钟。如此制备好的样品可在4℃保存1到2个月。
2:PCR反应的准备:
待各组份融化后先瞬时离心,然后轻弹混匀。按下表在已灭菌的PCR管中配制反应体系,每次实验需加一个阴性和一个阳性对照,测试反应管可以有多个。配制过程中应注意无菌,并注意避免操作产生的气溶胶造成样品间的交叉污染,推荐在有风压的设备如超净台或生物安全柜中进行操作。建议配制完毕后瞬时离心以使液体沉至管底。
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