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ELISA实验检测方法类型

阅读:1399发布时间:2014-3-3

ELISA实验基本原理是:

1.使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。

2.使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。

 

ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。可设计出各种不同类型的检测方法。  

 

1.双抗体夹心法,双抗体夹心法是检测抗原zui常用的方法。

 

2.捕获法测IgM抗体,血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在,后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗本多用捕获法,先将所有血清IgM(包括异性IgM和非特异性IgM)固定在固相上,在去除IgG后再测定特异性IgM。

 

3.双位点一步法,在双抗体夹心法测定抗原时,如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体,则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步(图15-5)。这种双位点一步不但简化了操作,缩短了反应时间,如应用高亲和力的单克隆抗体,测定的敏感性和特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平。

 

4.竞争法,竞争法可用于测定抗原,也可用于测定抗体。以测定抗原为例,受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合,因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。

 

5.间接法测抗体,间接法是检测抗体zui常用的方法,其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体,故称为间接法。

 

 

 


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