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质粒抽提的7大窍门介绍

阅读:262发布时间:2015-9-24

elisa试剂盒 质粒抽提方法即去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒。


质粒抽提zui常用的方法是碱裂解法,它具有得率高,适用面广,快速,纯度高等特点。关于碱裂解法的原理,复旦大学生化与分子生物学实验室的有一篇专论,大家可以去看一下。这是一篇美文,elisa试剂盒非常有趣。文中提到了一个与几乎所有能查到的资料不同的观点,也是非常有启发的。


下面介绍质粒抽提的7大窍门:

1:摇菌时间 - 过夜培养是一个普遍接受的概念,而且适合大部分情况。如果出现了问题,调整培养时间会有帮助:Nick 多,则增加培养时间;酶切出现问题,则减少培养时间。

2:起始菌体量 - 大家习惯说“从多少 ml 菌液中抽提质粒",但一定要养成每次都观察菌体量的习惯,因为质粒毕竟是在菌体中,而且,抽提质粒所用的试剂量,都只与菌体量有关。

elisa试剂盒3:菌体的*悬浮 - 如果没有*悬浮菌体,则残留的菌体团块在溶液 II 加入后,变成一个外围几乎*裂解,往里不*裂解,中间没有裂解的团块。这个团块在溶液 III 加入后,会有一部分蛋白质继续存在于溶液中,成为蛋白质残留的zui大根源。

4:使用相对过量的试剂 - 这是适合所有核酸抽提的建议。试剂相对过量的好处是:稳定性好,纯度高,操作更简单。如果认为这样不经济,就少用一点菌体。

5:裂解时间 - 加入溶液 II 后,混匀,体系能立即变得清澈。体系如果变得清澈了,马上加入溶液 III 中和。如果体系不马上变清澈,下次少用一点菌液,或者多用一点溶液。如今的质粒设计得越来越复杂了,奇怪的现象也越来越多,而所有的奇怪现象,多与裂解时间有关。

6:中和的操作 - 在 1.5ml 离心管中加入溶液 III 后,先颠倒两次,使管底朝上,用指头弹击管底数次,再颠倒混匀。效果非常好。

7:中和后的离心去蛋白 - 一定要将蛋白质*离心下去。如果发现离心后仍然有蛋白质漂浮在液面,继续离心的效果并不好;而将上清倒入另外一个离心管中,再离心,效果要好许多

Phospho-HSL (Ser660) 英文名称: 磷酸化荷尔蒙敏感脂肪酶抗体  0.1ml
HURP 英文名称: 肝癌上调蛋白抗体  0.2ml
Hrasls3 英文名称: HRAS样抑制因子3抗体  0.2ml
CBS 英文名称: *羧甲半*合成酶抗体  0.1ml
HEC1 英文名称: 癌细胞高表达蛋白Hec1抗体  0.1ml
Phospho-HSL (Ser865) 英文名称: 磷酸化荷尔蒙敏感脂肪酶抗体  0.1ml
HDAC1 英文名称: 组蛋白去乙酰化酶1抗体  0.2ml
C1GALT1C1 英文名称: 半乳糖基转移酶2抗体  0.1ml
phospho-HP1 alpha (Tyr24) 英文名称: 磷酸化异染色质蛋白1抗体(果蝇)  1ml
Phospho-HP1(Tyr43) 英文名称: 异染色质蛋白1磷酸化抗体(果蝇)  1ml
HIF 2 alpha 英文名称: 缺氧诱导因子2α /HIF-2α抗体  0.1ml
H1N1 matrix protein 2 英文名称: 甲型流感病毒M2抗体  0.2ml


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