细胞:GC-2 spd细胞
中文名称:小鼠精母细胞系
生长特性:贴壁
培养基:1640培养基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
冻存条件:50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO
GC-2 spd细胞传代:
1):细胞密度约80%时,吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞(注意根据实际情况,把握消化时间)。
2):镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁松动时;
(可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处,即可肉眼可见细胞层脱落,或吹打后镜下观察吹打处,即消化完成,否则继续消化)
直接吸掉yi酶,加3~4ml 培养基,轻轻吹打细胞层,把细胞层吹落,吹散。
3):取部分细胞悬液转移到新的培养皿中,添加适当的培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养。
4):注意培养基PH值变化情况,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。
(网络信息主针对网络推广作用,仅供参考,细胞培养请咨询细胞库管理员,以细胞库管理员提供给您的信息为准,操作前,如果有不明白之处,先咨询细胞库管理员,避免不必要的损失;)
胸膜肺炎放线杆菌(APP)核酸扩增检测:
实验仪器:主要包括ABI GeneAmp PCR System7700、ABI GeneAmp PCR System7500、ABI PRISM 7300、LightCycler等毛细管的仪器,MJ Opticon系列或取得资格认证的定量PCR仪。
实验方法:
DNA提取 样品处理
肺脏、淋巴结等固体组织:
取100mg左右组织标本,加入1ml生理盐水,用研磨器充分研磨,取50μl左右组织匀浆转移到1.5mL的EP管中,加入50μl核酸提取液B(提取液内含不溶物质,使用前室温解冻并充分混匀),充分混匀。100℃处理10分钟,13,000rpm离心3分钟,取上清液4μl做PCR反应。
痰液、培养物、体液等液体标本:
充分混匀标本,取50μl液体标本,加入加50μl核酸提取液B(提取液内含不溶物质,使用前室温解冻并充分混匀),充分混匀。100℃处理10分钟,13,000rpm离心3分钟,取上清液4μl做PCR反应。
阴性质控品:取50 μl阴性质控品加入50μl核酸提取液B,充分震荡。后100℃裂解10分钟,然后13,000rpm离心3分钟,取上清液4μl做PCR反应。
APP-阳性质控品:直接取4μl进行PCR扩增。或按照PCR扩增介绍方法进行定量分析。