兔子白介素3(IL-3)ELISA试剂盒操作步骤详细说明

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中文名：兔子白介素3(IL-3)ELISA试剂盒

中文别名：兔子白介素3(IL-3)ELISA Kit

供应商：上海远慕

规格：48t/96t

保存：2-8℃

有效期：6个月

特点：敏感性高、特异性强、重复性好、试剂稳定、易保存，操作简便。

用途：用于测定血清，血浆及相关液体样本中相关含量或活性。

ELISA试剂盒种属：人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、猪犬、牛羊、鸡鸭、植物ELISA试剂盒等。

试剂盒检测目的：用于测定血清，血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。

适用范围：仅用于科研实验，禁用于临床。

兔子白介素3(IL-3)ELISA试剂盒操作步骤

操作步骤：

1、待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。 

2、酶标板置4℃，包被过夜。

3、洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后，即甩去)，之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。

4、阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。 

5、酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 

6、洗板，同(4)。 

7、每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。 

8、酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 

9、洗板，同(4)。 

10、每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。 

11、每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。 

12、分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，zui终测得的OD值为两者之差(W1-W2)，以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。

13、数据处理：在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

注意事项：

1、在收集标本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。

2、建议新鲜标本收集后尽早检测。1-3天左右检测的样本可储存在4℃备用。如有特殊原因需要周期性收集标本，请将标本及时分装后放在-20℃或- 70℃条件下保存，避免反复冻融。

3、当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。

4、洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。

5、一次加样时间控制在5分钟内。

6、请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。

7、如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请zui后乘以稀释倍数。

8、在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。

9、底物请避光保存。

10、不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。

性能优点：

1、、灵敏、特异的抗体；

2、稳定的重复性和可靠性；

3、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；

4、适用血清，血浆，组织匀浆液，细胞培养上清液，尿液等等多种标本类型。

实验原理：

采用双抗体夹心ABC-ELISA法。

标本的处理：

1、细胞培养上清液

根据需要用试剂盒中的标准稀释液稀释样品，然后按照说明书所述方法检测。推荐稀释浓度是稀释5倍。

2、脑脊液

根据需要用试剂盒中的标准稀释液稀释样品，然后按照说明书所述方法检测。推荐稀释浓度是5倍。

3、血浆

a、用EDTA2K离心收集在真空血液收集管中的血液，5,000×g，15分钟，4℃，分离血浆样品，然后储存在零下80℃直到使用。

b、用试剂盒中的标准稀释液126倍稀释血浆以避免血浆中的干扰物质影响检测，按照说明书方法检测。

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