大鼠白介素10（IL-10）ELISA试剂盒检测说明书

　　大鼠白介素10(IL-10)ELISA试剂盒属大鼠ELISA试剂盒类，又称大鼠白介素10(IL-10)ELISA Kit，主要用于测定血清，血浆及相关液体样本中相关含量或活性。更多关于本品的详情咨讯由上海远慕生物提供讲述。

大鼠白介素10(IL-10)ELISA试剂盒检测说明书

　　【信息说明】

　　中文名：大鼠白介素10(IL-10)ELISA试剂盒

　　别名：大鼠白介素10(IL-10)ELISA Kit

　　供应商：上海远慕

　　规格：48t/96t

　　保存：2~8℃

　　有效期：6个月

　　样本：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。

　　特点：敏感性高、特异性强、重复性好、试剂稳定、易保存，操作简便。

　　用途：用于测定血清，血浆及相关液体样本中相关含量或活性。

　　种属：人、大鼠、小鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等。

　　检测原理：采用双抗体夹心ABC-ELISA法。

　　【配制组成】

　　1、酶联板(Assay plate )：一块(96孔)

　　2、标准品(Standard)：2瓶(冻干品)

　　3、样品稀释液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶

　　4、生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent)：1×10ml/瓶

　　5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent)：1×10ml/瓶

　　6、生物素标记抗体(Biotin-antibody)：1×120μl/瓶(1：100)

　　7、辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin)：1×120μl/瓶(1：100)

　　8、底物溶液(TMB Substrate)：1×10ml/瓶

　　9、浓洗涤液(Wash Buffer)：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍

　　10、终止液(Stop Solution)：1×10ml/瓶(2N H2SO4)

　　【样本处理】

　　1、血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过一夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

　　2、血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

　　3、组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果)，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

　　4、细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

　　【操作步骤】

　　1、编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2 孔、阳性对照2 孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)。

　　2、加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

　　4、配液：将20倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml后备用。

　　5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

　　7、显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟。

　　8、终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　9、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

　　【注意事项】

　　1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2、浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　3、各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

　　4、请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。

　　5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6、底物请避光保存。

　　7、严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

　　8、所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

　　9、本试剂不同批号组分不得混用。

　　10、如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

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