大鼠降钙素（CT）ELISA试剂盒操作流程

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大鼠降钙素(CT)ELISA试剂盒操作流程

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　　【信息说明】

　　中文名：大鼠降钙素(CT)ELISA试剂盒

　　别名：大鼠降钙素(CT)ELISA Kit

　　供应商：上海远慕

　　规格：48t/96t

　　保存：2~8℃

　　有效期：6个月

　　样本：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。

　　特点：敏感性高、特异性强、重复性好、试剂稳定、易保存，操作简便。

　　用途：用于测定血清，血浆及相关液体样本中相关含量或活性。

　　种属：人、大鼠、小鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等。

　　检测原理：采用双抗体夹心ABC-ELISA法。

　　【样本收集保存】

　　1、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

　　2、血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

　　3、细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

　　4、组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

　　5、保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

　　【操作流程】

　　1、待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。 

　　2、酶标板置4℃，包被过夜。

　　3、洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后，即甩去)，之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。

　　4、阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。 

　　5、酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 

　　6、洗板，同(4)。 

　　7、每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。 

　　8、酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 

　　9、洗板，同(4)。 

　　10、每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。 

　　11、每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。 

　　12、分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，终测得的OD值为两者之差(W1-W2)，以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。

　　13、数据处理：在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

　　【注意事项】

　　1、不同厂家生产的试剂盒因生产工艺和操作方法略有不同，务必按照所用试剂盒严格操作，否则容易产生检测结果的不确定性.

　　2、若不同批号人ELISA试剂盒的不同组分(A液或酶工作液)，或不同试剂的不同组分进行交叉使用，有可能出现显色浅或本底高，花板等情形。

　　3、反应时间的误差，做大量标本时，一孔和后一孔以及一些特殊标本可能影响较大。

　　4、临界值附近标本波动为正常现象，任何试剂均不可避免。可以考虑将标本做奇数次复检。

　　5、加样时样品量误差，对于阴或很阳的标本影响不大，但对阈值附近的标本影响极大，建议校对加样器。

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