人胎儿纤连蛋白（fFN）ELISA试剂盒操作步骤

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人胎儿纤连蛋白(fFN)ELISA试剂盒操作步骤

【信息说明】

中文名：人胎儿纤连蛋白(fFN)ELISA试剂盒

别名：人胎儿纤连蛋白(fFN)ELISA Kit

供应商：上海远慕

规格：48t/96t

保存：2-8℃

有效期：6个月

检测原理：狗胆囊收缩素(CCK)ELISA试剂盒采用双抗体夹心ABC-ELISA法

用途：用于测定血清，血浆及相关液体样本中相关含量或活性。

特点：敏感性高、特异性强、重复性好、试剂稳定、易保存，操作简便。

预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中IL-38含量。

检测目的:用于测定血清，血浆及相关液体等样本，例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。

ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在检测过程中除正常反应外，有时常见到一些错误的结果。

引起ELISA测定错误结果的原因主要有：

①标本因素;

②试剂因素;

③操作因素。

【样本保存】

1、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2、血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3、细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4、组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5、保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

【操作步骤】

1、待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。 

2、酶标板置4℃，包被过夜。

3、洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后，即甩去)，之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。

4、阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。 

5、酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 

6、洗板，同(4)。 

7、每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。 

8、酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 

9、洗板，同(4)。 

10、每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。 

11、每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。 

12、分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，zui终测得的OD值为两者之差(W1-W2)，以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。

13、数据处理：在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

【注意事项】

1、用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。

2、每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。

3、为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。

4、未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。

5、建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。

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