人5核苷酸酶（5-NT）ELISA试剂盒检测说明

上海远慕生物讲述人5核苷酸酶(5-NT)ELISA试剂盒检测说明及其他咨讯，本司现货供应不同种属ELISA试剂盒，提供免费代测服务，种属有大鼠，小鼠，人，马，猴，鱼，羊，鸡，兔，猪，狗，植物，牛，豚鼠及其他种属等，品种齐全，价格实惠，欢迎订购！

人5核苷酸酶(5-NT)ELISA试剂盒检测说明

【信息说明】

中文名：人5核苷酸酶(5-NT)ELISA试剂盒

别名：人5核苷酸酶(5-NT)ELISA Kit

供应商：上海远慕

规格：48T/96T

保存温度：2-8℃低温保存

有效期：6个月

试剂盒成分：酶标板，试剂，标准品等。

检测原理：狗胆囊收缩素(CCK)ELISA试剂盒采用双抗体夹心ABC-ELISA法

用途：用于测定血清，血浆及相关液体样本中相关含量或活性。

特点：敏感性高、特异性强、重复性好、试剂稳定、易保存，操作简便。

实验方法： 酶联免疫法/酶免法(ELISA)

ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在检测过程中除正常反应外，有时常见到一些错误的结果。

引起ELISA测定错误结果的原因主要有：

①标本因素;

②试剂因素;

③操作因素。

【成分配制】

1、预包被板: 96T/48T

2、酶标记抗体: (30倍浓缩)HRPIgG,亲合纯化 0.4mL x 1

3、标准品: -6 0.5mL x 2

4、EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1

5、标记抗体稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1

6、显色剂: TMB底物液 15mL x 1

7、终止液: 1N 12mL x 1

8、浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1

【样本处理】

包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

1、血清：
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

2、血浆：
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

3、尿液：
用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

4、细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并 放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5、组织标本：
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

【操作步骤】

1、编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)。

2、加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4、配液：将20倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml后备用。

5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7、显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟。

8、终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

9、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)；测定应在加终止液后15分钟以内进行。

【注意事项】

1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2、浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3、各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4、请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6、底物请避光保存。

7、严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8、所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9、本试剂不同批号组分不得混用。

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