Plasmid Mini Kit I（100）

上海远慕生物代理销售美国Omega品牌系列产品，包含有：质粒小量提取试剂盒I型，型号包含：Plasmid Mini Kit I(100)，Plasmid Mini Kit I(200)，Plasmid Mini Kit I(1000)-v Spin Column，质粒小量提取试剂盒II型，质粒中量提取试剂盒，质粒大量提取试剂盒，快速过滤超大量质粒提取试剂盒，其他系列提取试剂盒，耗材，溶液等，了解更多更详细的Omega产品请来电我司销售人员，我们将竭诚为您解答每一个问题。

名称：质粒小量提取试剂盒I型

品牌：Omega

供应商：上海远慕

系列：质粒小量提取试剂盒

型号：Plasmid Mini Kit I(100)

货号：D6943-01

用途：从小于5ml培养过夜的细菌培养液中纯化约35ug质粒DNA

质粒小量提取试剂盒特性与优点：
安全-无酚lvfang等危险的有机物抽提
简单-硅胶柱过滤操作
快速-在30分钟内完成多个样品的抽提工作
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质粒小量提取试剂盒I型,Plasmid Mini Kit I(100)操作步骤:

1、取1-5ml细菌培养物，12000rpm离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入250ul溶液Ⅰ(请先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或旋涡振荡器*悬浮细菌细胞沉淀。注意：如果菌块未*混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。

3、向离心管中加入250ul溶液Ⅱ，温和地上下翻转6-8次使菌体让其裂解。注意：混匀一定要温和，以免污染细菌基因组DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过5min，以免质粒受到破坏。

4、向离心管中加入350ul溶液Ⅲ，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。12000rpm离心10min，用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中，尽量不要吸出沉淀。注意：溶液Ⅲ加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。

5、将上一步所得上清液加入吸附柱中（吸附柱加入收集管中），室温放置2min，12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

6、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水yichun)，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

7、向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

8、12000rpm离心2min，将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

9、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50-200ul经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置2min，12000rpm离心1min。

10、为了增加质粒的回收效率，可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中，室温放置2min，12000rpm离心1min。 

质粒小量提取试剂盒I型注意事项:

1.使用前请先检查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出现混浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，待溶液恢复澄清后再使用。溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和漂洗液使用后应立即拧紧盖子。

2.洗脱缓冲液体积不应少于50ul，体积过小影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影晌，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率，DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

3.如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应加大菌体使用量，使用5-10ml过夜培养物，同时按照比例增加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量，吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率。

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