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上海瑞齐实业科技有限公司
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抗体来源(宿主):兔源、鼠源
克 隆:兔多克隆抗体鼠源单克隆抗体
类 型:一抗
性 状: 冻干粉
保存条件:Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C.
细胞流式实验检测操作方法 :
1. 每个样品取2支流式检测管,分别注明同型对照和待测,两管分别加入106-7/100μl个待侧细胞(若细胞浓度低或加入的细胞悬液较多,可1200转/每分钟,10分钟低温离心,弃上清,保证100μl被检样品)
2. 同型对照管中加入荧光标记同型对照抗体,做阴性对照;待测管中加入荧光标记的一抗,做为实验管,各加3μl (按抗体使用说明书,一抗可做选择几个梯度1:20、50、100倍稀释)混匀即可。
……
5. 上机检测,先做同型对照,调整电压至阴性区范围,再测实验管即可。
免疫荧光技术的实验步骤1. 直接免疫荧光法测抗原
⑴基本原理
将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低;而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。
⑵试剂与仪器
磷酸盐缓冲盐水(PBS):0.01mol/L,pH7.4
荧光标记的抗体溶液:以0.01mol/L,pH7.4的PBS进行稀释
缓冲甘油:分析纯无荧光的甘油9份+ pH9.2 0.2M碳酸盐缓冲液1份配制
搪瓷桶三只(内有0.01mol/L,pH7.4的PBS 1500ml)
有盖搪瓷盒一只(内铺一层浸湿的纱布垫)
荧光显微镜
玻片架
滤纸
37℃温箱等。
⑶实验步骤
① 滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待检标本片上,10min后弃去,使标本保持一定湿度。
② 滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液,使其*覆盖标本,置于有盖搪瓷盒内,保温一定时间(参考:30min)。
③ 取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS冲洗后,再按顺序过0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸3-5 min,不时振荡。
④ 取出玻片,用滤纸吸去多余水分,但不使标本干燥,加一滴缓冲甘油,以盖玻片覆盖。
⑤ 立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度,一般可用“+”表示:
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