犬铁蛋白（FE）酶联免疫分析试剂盒
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：
96T
10ng/ml-320ng/ml
使用目的：
本试剂盒用于测定犬血清、血浆及相关液体样本中铁蛋白（FE）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中犬铁蛋白（FE）水平。用纯化的犬铁蛋白（FE）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入铁蛋白（ FE），再与 HRP标记的铁蛋白（FE）抗体结合，形成抗体 -抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的铁蛋白（FE）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中犬铁蛋白（FE）浓度。
试剂盒组成
30倍浓缩洗涤液
20ml×1瓶
6ml×1瓶
12孔×8条
6ml×1瓶
6ml×1瓶
6ml×1/瓶
终止液
6ml×1瓶
2 酶标试剂
标准品（640ng/ml） 0.5ml×1瓶
3 酶标包被板
4 样品稀释液
5 显色剂 A液
6 显色剂 B液
标准品稀释液
1.5ml×1瓶
1份
10 说明书
11 封板膜
12 密封袋
2张
1个
标本要求
犬铁蛋白（FE）酶联免疫分析试剂盒1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
320ng/ml
160ng/ml
80ng/ml
40ng/ml
20ng/ml
5号标准品
4号标准品
3号标准品
2号标准品
1号标准品
150µl的原倍标准品加入 150µl标准品稀释液
150µl的 5号标准品加入 150µl标准品稀释液
150µl的 4号标准品加入 150µl标准品稀释液
150µl的 3号标准品加入 150µl标准品稀释液
150µl的 2号标准品加入 150µl标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl（样品zui终稀释度为 5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
犬铁蛋白（FE）酶联免疫分析试剂盒温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。
配液：将 20倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此重复 5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。
温育：操作同 3。
洗涤：操作同 5。
显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10.终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后 15分钟以内进行。
操作程序总结：
计算以标准物的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
