【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 幼兔肺成纤维样细胞使用说明书
形态特性 成纤维样细胞
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞系来源于一出生三天的幼兔的正常肺组织。2014年由中科院昆明细胞库建立。
培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
传代方法 1:2传代;3-4天一次
传代情况 P2
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 荧光法(-)
STR -
同工酶 无
染色体
使用权限 A类
产品名称 | 幼兔肺成纤维样细胞使用说明书 |
货期 | 3-5天 |
发货地 | 上海 |
复苏操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合
操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
水合三氯化钌 Ruthenium(III) chloride 14898-67-0
水合茚三酮 Ninhydrin hydrate 485-47-2
酪蛋白胨 IRON PEPTONATE 91079-40-2
水解乳蛋白 大豆中提取 CENTA(TM) BETA-LACTAMASE SUBSTRATE 9073-60-3
水杨异羟肟酸 Salicylhydroxamic acid 89-73-6
顺,反-2-辛烯 NA
顺-2-丁烯-1,4-二醇 2-Butene-1,4-diol 6117-80-2
顺-4-羟基-L-* cis-4-Hydroxy-L-proline 618-27-9
顺丁烯二酸 Maleic acid 110-16-7人17羟孕酮(17-OHP)免疫试剂盒 Human 17-Hydroxyprogesterone,17-OHP ELISA Kit
人17羟皮质类固醇(17-OHCS)免疫试剂盒 Human 17-Hydroxycorticosteroids,17-OHCS ELISA Kit
人17-α-羟化酶(17-α-OH)免疫试剂盒 Human 17-α-hydroxylase,17-α-OH ELISA Kit
人16α羟基雌酮1(16-α OHE-1)免疫试剂盒 Human 16-αHydroxyestrogen 1,16-α OHE-1 ELISA Kit
人15-羟基前列腺素脱氢酶(15-PGDH)免疫试剂盒 Human 15-PGDH ELISA Kit
人15-epi-氧脂素 A4(15-epi-LXA4)免疫试剂盒 Human 15-epi-Lipoxin A4,15-epi-LXA4 ELISA Kit
人14-3-3 蛋白 beta/alpha(YWHAB)免疫试剂盒 Human YWHAB ELISA kit
人12-脂氧化酶/脂加氧酶(LOX-12)免疫试剂盒 Human 12-lipoxygenase,LOX-12 ELISA Kit
人12羟二十烷四烯酸(12-HETE)免疫试剂盒 Human 12-hydroxyeicosatetraenoic acid,12-HETE ELISA Kit
人11-脱氧*免疫试剂盒 Human 11-Deoxycortisol ELISA Kit
人11去氢血栓烷B2(11-DH-TXB2)免疫试剂盒 Human 11-dehydro-thromboxane B2,11-DH-TXB2 ELISA Kit