产品名称 | 狗肾细胞隆突型;MDCK superdome使用说明书 |
货期 | 3-5天 |
发货地 | 上海 |
细胞名称 狗肾细胞隆突型;MDCK superdome使用说明书
形态特性 上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性 来源于狗肾细胞MDCK,可以形成隆突。
培养条件 DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) 10%FBS
传代方法 1:6~1:10传代;2~3天1次。
传代情况
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法(-)
STR -
同工酶
染色体
使用权限 A类
复苏操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
人P0蛋白抗体(IgM)免疫试剂盒 Human myelin protein zero antibody IgM ELISA Kit
人NOD样受体(NLR)免疫试剂盒 Human NOD-like receptor9,NLR ELISA Kit
人NET-1 免疫试剂盒 Human NET-1 ELISA Kit
人I 型胶原蛋白(COL I)免疫试剂盒 Human Collagen Type I,COL I ELISA Kit
人H-钙粘着蛋白/H-钙粘连蛋白(H-Cad/CDH13)免疫试剂盒 Human E-Cadherin ELISA Kit
人HSP60 IgM抗体免疫试剂盒 Human Hsp60 IgM antibody ELISA kit
人HSP60 IgG抗体免疫试剂盒 Human Hsp60 IgG antibody ELISA kit
人HSP60 IgA抗体免疫试剂盒 Human Hsp60 IgA antibody ELISA kit三氟甲磺酸钠 Sodium trifluoromethanesulfonate 2926-30-9
三氟甲磺酸钕 NEODYMIUM(III) TRIFLUOROMETHANESULFONATE 34622-08-7
三氟甲磺酸镨 PRASEODYMIUM (III) TRIFLUOROMETHANESULFONATE 52093-27-3
三氟甲磺酸钐 SAMARIUM(III) TRIFLUOROMETHANESULFONATE 52093-28-4
三氟甲磺酸铈 CERIUM(III) TRIFLUOROMETHANESULFONATE 76089-77-5
三氟甲磺酸铁 Iron(III) trifluoromethanesulfonate 63295-48-7
三氟甲磺酸铜 COPPER(II) TRIFLUOROMETHANESULFONATE 34946-82-2
三氟甲磺酸锌 ZINC TRIFLUOROMETHANESULFONATE 54010-75-2
三氟甲磺酸亚铁 IRON(II) TRIFLUOROMETHANESULFONATE 59163-91-6
三氟甲磺酸亚锡 TIN(II) TRIFLUOROMETHANESULFONATE 62086-04-8
三氟甲磺酸钇 YTTRIUM(III) TRIFLUOROMETHANESULFONATE 52093-30-8
三氟甲磺酸镱 YTTERBIUM(III) TRIFLUOROMETHANESULFONATE HYDRATE 54761-04-5