丹麦SSI肺炎球菌血清分型试剂盒
应用
丹麦国家血清研究院的诊断用链球菌抗血清用于通过Neufeld方法1和Lancefield方法2,3对链球菌进行定性识别和分型。
简介
丹麦国家血清研究院的链球菌抗血清在兔体内培养。链球菌抗血清可用于对A、B、C、D和L群链球菌进行识别以及对B群链球菌和猪链球菌进行血清分型。抗血清供应规格为1 mL瓶装产品（以*作为防腐剂）。血清生产过程中在需要时采用吸附方法排除交叉反应。
原理
Lancefield方法：当一种酸性抗原提取物与直接针对细菌表面成分的特异性抗血清混合时，细胞之间将通过抗原-抗体键连接在一起而形成聚集（沉淀）。当在毛细管内反应时，这种现象可以用裸眼直接观察到。
Neufeld方法：通过将特异性抗血清与一种链球菌培养物混合，可以确定荚膜抗原。荚膜反应是链球菌荚膜多糖与其同源性抗体之间发生原位免疫沉淀反应的结果。显微镜下阳性反应表现为荚膜可见和链球菌凝集。荚膜的大小取决于血清型和生长条件。
需要但未提供的材料
Neufeld检测：
5%血液琼脂平板
接种环
移液管或任何可以移取液滴的其它用具
载玻片和盖玻片
浸油
pH 7.4的盐水
相差显微镜（放大100 X，油浸物镜）
Lancefield检测：
5%血液琼脂平板
葡萄糖肉汤
接种环
离心机
移液管或任何可以移取液滴的其它用具
0.06N, 0.1N和0.2N HCl溶液
水浴（100ºC）
酚红（指示剂）
0.2N NaOH溶液
毛细管
步骤
通用
每一血清型将在Lancefield方法或Neufeld方法中显示反应阳性（在血清出厂证书上将指示优先选择的方法）。当与阴性对照比较时，通常结果会更加明显。
Neufeld检测
1. 将一小滴（3-6 μL）盐水滴在玻片上。
2. 从血液琼脂平板上转移小量培养物到玻片上，然后与盐水混合均匀。
3. 加入等量抗血清，然后与液滴充分混合。
4. 立即在混合物上加盖盖玻片（必须保持湿润）。
5. 在相差显微镜下观察混合物。反应可在半小时内保持稳定（在未干燥的前提下）。
6. 如可见荚膜（细菌表现肿胀），则反应为阳性。
Lancefield检测（改良版本）
使链球菌于5%血液琼脂平板上生长过夜。
1. 将少量菌落加入6 mL葡萄糖肉汤，然后在35-37ºC下培养过夜。
2. 将悬液以3000 rpm转速离心10分钟，然后移去上清液。
3. 将0.06N、0.1N或0.2N 的HCl溶液 0.1 mL加入细菌沉淀物中（在血清出厂证书上将指示优先选择的方法）。
4. 将酸性悬液置于水浴（100ºC）中加热15分钟。
5. 在自来水中冷却酸性悬液。
6. 通过滴入0.2N NaOH溶液直至液体变为棕/橙色［使用酚红作为pH指示剂，红色（pH > 8.2）－黄色（pH < 6.4）］调整pH值至7左右。
7. 将悬液以3000 rpm的转速离心10分钟，然后将上清液（酸性抗原提取物）转移到一个新的玻片上。
8. 使用毛细管吸取等量的抗血清（首先）和酸性抗原提取物（其次）。必须将抗血清置于毛细管上部，以便使其扩散通过酸性提取物。
9. 阳性反应为发生沉淀。正对光源读取结果。
保存条件与有效期限
避光保存于2-8°C。有效期限见包装。有时在长期保存后可见因脂蛋白沉淀引起的混浊。采用离心（10,000g）然后过滤除菌（0.22 μm）的方法即可除去沉淀和/或污染物。
丹麦SSI肺炎球菌血清分型试剂盒
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