兔角膜后基质层成纤维细胞；RCBBF使用说明书

【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

细胞名称  兔角膜后基质层成纤维细胞；RCBBF使用说明书
形态特性   成纤维样
生长特性  贴壁生长
特征特性   北京眼科研究所建系细胞。 
培养条件   F12: Ham's F12 Nutrient Mixture  5%FBS
传代方法   1:3~1:6传代；2~3天1次。
传代情况  P5
冻存条件   基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测  培养法（-）
STR   -
同工酶  
染色体   
使用权限  A类

复苏操作要点： 
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。 
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过zui易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。 
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。 
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。 
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合
操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
十八氢屈    NA    
十六烷;鲸蜡烷    Hexadecane;Alkane C16;Bioctyl;    544-76-3
十六烷基二甲基苄基氯化铵    Benzyldimethylhexadecylammonium chloride    122-18-9
十六烷基二甲基乙基* （EHDAB）    CETYLDIMETHYLETHYLAMMONIUM BROMIDE    124-03-8
十六烷基*基*培养基    NA    
十七酸甲酯;珠光脂酸甲酯    Heptadecanoic acid Methyl ester;Methyl heptadecanoate;Hexadecane-1-carboxylic acid Methyl ester    1731-92-6
十三烷色谱标准品    NA    
十四硫醇    1-Tetradecanethiol    2079-95-0
肉豆蔻酸甲酯    Methyl Myristate    124-10-7
十四烷基二甲基苄基氯化铵 (TDBAC)    Tetradecyldimethylbenzylammonium chloride    139-08-2
十四烷基*基氯化铵    Tetradecyl trimethyl ammonium chloride    4574/4/3
十四烷    TETRADECANE    629-59-4人8-羟基*DNA糖苷酶(OGG1)免疫试剂盒    Human OGG1 ELISA kit
人5羟色胺(5-HT)免疫试剂盒    Human 5-Hydroxytryptamine,5HT ELISA Kit
人5羟基吲哚乙酸(5-HIAA)免疫试剂盒    Human 5-hydroxyindolacetic acid,5-HIAA ELISA Kit
人5羟二十碳四烯酸(5-HETE)免疫试剂盒    Human 5-hydroxyeicosatetraenoic acid,5-HETE ELISA Kit
人5核苷酸酶(5-NT)免疫试剂盒    Human 5-Nucleotidase,5-NT ELISA Kit
人5'-AMP活化蛋白激酶α-2催化亚基(PRKAA2)免疫试剂盒    Human PRKAA2 ELISA Kit
人Ⅳ型前胶原氨基末端肽(PⅣNP)免疫试剂盒    Human N-terminal procollagen Ⅳ propeptide,PⅣNP ELISA Kit
人Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)免疫试剂盒    Human Collagen Type Ⅳ,COL Ⅳ ELISA Kit
人4-羟基壬烯酸(HNE)免疫试剂盒    Human 4-Hydroxynonenal,HNE ELISA Kit
人40S核糖体蛋白S19(RPS19)免疫试剂盒    Human RPS19 ELISA Kit
人Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)免疫试剂盒    Human procollagen Ⅲ propeptide,PⅢP ELISA Kit